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您的细胞急需一份“身份”证明

 

ATCC发现很多用于基础或生物医学研究的细胞系并非来自于ATCC或其他细胞库。很多时候,这些细胞系很少或者基本上没有接受过细胞验证。当用这些细胞进行研究的时候,最好对细胞进行验证以保证实验结果真实可靠。当用这些细胞发表文章的时候,文章的材料与方法部分应该包含细胞验证的方法和细节。

到底哪些验证实验是ATCC推荐做的,请查看本期内容。

细胞系的验证需要一系列的验证实验。通过验证确认细胞系的身份以及证明该细胞系不存在污染。通过标准化的程序,细胞验证可以确认细胞的来源,并确保有效的,可重复的实验结果。若使用传代次数过多、没有定期检测或者交叉污染的细胞进行实验,往往造成虚假数据和实验的不可重复性。

以下验证实验是ATCC推荐的基本验证实验:


1 细胞形态学检查

通过显微镜观察细胞的形态。这是鉴定细胞状态最简单和直接的方法。

Fig1 ATCC三种不同的细胞在高密度时候的状态



2 生长曲线分析

通过细胞在某种刺激物下的增殖情况,可以获得有价值的信息。若细胞增殖情况出现异常如突然增加或减少,说明该细胞系可能出现问题。

建立细胞生长曲线是监测细胞一致性的重要数据,也可以确定一些重要因素,比如什么时候该传代,最佳的稀释比率,以及不同细胞浓度下接种的有效性。生长曲线分析同时有助于确定细胞的倍增时间。在进行实验的时候,请使用生长曲线一致的细胞。


3 同工酶分析验证物种

同工酶分析可以用于鉴定细胞的物种来源。不同种属的同工酶样品电泳后会呈现不同的分布模式。通过电泳结果,可以判断物种来源,以及样品是否被其他种属样品污染。具体操作方法,请参考以下书籍:

Culture of Animal Cells:

A Manual of Basic Technique by R. Ian Freshney, 5th ed. Pp. 275 – 278


4 STR分析(DNA指纹)

STR基因位点由长度为3~7个碱基对的短串连重复序列组成,这些重复序列广泛存在于人类基因组中,可作为高度多态性标记,被称为细胞的DNA指纹。

每个细胞系都有唯一的STR重复模式。ATCC STR分析采用多重PCR同时扩增amelogenin 基因以及基因组中8个多态性marker。根据STR分型结果与STR数据库比对从而推算出样品所属的细胞系或可能的交叉污染的细胞系名称。

ATCC采用Promega PowerPlex®1。2系统及the Applied Biosystems Genotyper 2。0软件对扩增产物进行分析。

 

Fig 2 STR分析结果


5 支原体检测

作为细胞培养的主要问题,支原体污染对于细胞系产生很多不良影响。它通过不同的方式改变了细胞的行为和代谢方式。对于连续培养的细胞系,对细胞进行定期支原体检测至关重要。其中一种相对简单和可靠的支原体检测方法是荧光染色法。Hoechst 33258荧光能够特异性结合DNA。在显微镜(500X)下可以直观的看到检测细胞是否受到支原体的污染。

Fig 3 支原体阴性和阳性细胞

作为权威的生物资源中心,除了上述提到的基本检测项目外,ATCC对所有批次细胞进行的检测项目还包括冻存后的复苏率,好氧或厌氧条件下的无菌测试,常见病毒等多项检测。因此,您可以放心从ATCC购买细胞。

除了可以从ATCC获得有保障的细胞外,ATCC STR分析的技术服务开始面向中国客户。如果您想对实验室里使用多年的或者从其他实验室获得的细胞进行STR分析,您仅需简单三步就可完成。首先,中原公司会将ATCC 样品收集试剂盒送到您手上。然后,您不需要抽提基因组DNA。只需要将细胞样品点在试剂盒中提供的FTA卡上,风干后,将FTA卡放入试剂盒里提供的自封袋中,即完成样品收集工作。最后,您仅需将样品寄给ATCC,就可以坐等ATCC出报告。

 

 

中原生物是ATCC公司授权中国独家代理

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